一、豬藍耳病檢測的檢驗原理：

　　本試劑盒應用固相酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）原理，由包被有高純度的豬藍耳病毒抗原的微孔反應板、辣根過(guò)氧化物酶標記的抗豬IgG及其它試劑配套組成。其反應機理為包被抗原與樣本中的PRRSV-Ab結合，再與酶標抗豬IgG抗體形成“包被抗原+PRRSV-Ab+酶標抗豬IgG抗體”復合物，加入顯色劑，通過(guò)酶催化反應顯色。顯色深淺與PRRSV-Ab的量成正比，當樣本反應顯色后，經(jīng)酶標儀檢測所得結果超過(guò)設定的臨界值時(shí)結果判為陽(yáng)性，即表明免疫產(chǎn)生了抗體或有自然感染存在。

　　二、豬藍耳病檢測的樣本要求：

　　1．本試劑檢測的樣本為豬血清，樣本應無(wú)菌采集，2℃～8℃貯存應不超過(guò)一周，長(cháng)期應在-20℃以下保存。

　　2．避免使用嚴重溶血、有沉淀物、含懸浮纖維蛋白及污染長(cháng)菌及含疊氮鈉血清樣本。

　　三、豬藍耳病檢測的實(shí)驗準備：

　　1．試劑盒組分回溫平衡:試劑盒組分在實(shí)驗前，先取出置室溫30min，可以獲得較佳結果。.

　　2．樣本稀釋?zhuān)河迷噭┖刑峁┑臉颖鞠♂屢簩颖咀?0倍稀釋?zhuān)♂尩臉颖净旌暇鶆蚰苋〉幂^好結果。

　　3．配制洗滌液：將試劑盒所提供濃縮洗滌液直接用去離子水稀釋20倍（例：將50ml洗滌液加入950ml去離子水中）。若20倍濃縮洗滌液出現結晶，屬正?，F象，放置37℃至溶解后即可。

　　四、豬藍耳病檢測的檢驗方法：

　　1．加樣：根據樣本數量，取所需板條，檢測時(shí)，設陰、陽(yáng)性對照各2孔，分別加入不用稀釋的陰、陽(yáng)性對照血清100μl于相應孔中（可不設空白對照）。其余為樣本孔，每孔加100μl用樣本稀釋液稀釋好的樣本（可做單孔也可雙孔檢驗）。

　　2．溫育：加樣后，蓋上蓋板膜，置37℃溫育30分鐘。

　　3．洗板：甩去孔內液體，用洗滌液注滿(mǎn)反應板孔，靜置10s左右，直接甩出，洗滌3次，洗滌后拍干板內液體。

　　4．加酶：每孔加酶標記物100μl。

　　5．溫育：加好酶標記物后蓋上蓋板膜，置37℃溫育30分鐘。

　　6．洗板：同步驟3。

　　7．顯色：每孔加顯色劑100μl，振蕩混勻，37℃避光反應10分鐘。

　　8．終止：每孔加終止液50μl，振蕩10秒，充分混勻，終止后即讀數。

　　9．讀數：以450nm/630nm雙波長(cháng)檢測，讀取各孔吸光度值（OD值）。

　　五、豬藍耳病檢測的結果判定：

　　在酶標儀上測各孔的OD值。檢測結果有效的條件是陽(yáng)性對照孔的平均OD值≥0.6，陰性對照孔的平均OD值必須＜0.15；樣品中抗體存在與否，或樣本中抗體的相對水平的高低由S/P值決定，S/P值計算時(shí)按以下方式處理:

　　S/P=(樣本OD450/630值-NCx(—))/（PCx(—)-NCx(—))，其中NCx(—)表示陰性對照孔平均OD450/630值，PCx(—)表示陽(yáng)性對照孔平均OD450/630值；

　　當樣本的S/P≥0.2時(shí)判為陽(yáng)性；樣品S/P值＜0.2時(shí)判為陰性；

　　若進(jìn)行大量樣本檢測時(shí)，可使用試劑盒專(zhuān)業(yè)分析軟件進(jìn)行分析數據結果。