斑點(diǎn)ELISA法

斑點(diǎn)酶聯(lián)免疫吸附試驗（Dot-ELISA）又稱(chēng)點(diǎn)免疫結合法（Dot-immunobinding）或抗原斑點(diǎn)試驗（Antigen spot test,AST）,為Hawkes等參照核酶的斑點(diǎn)雜交法改良而成，是以纖維素膜為載體的一種新型免疫檢測技術(shù)【6】。據報道，其敏感性及特異性高于或相當于常規ELISA及放射免疫測定，已被廣泛應用于免疫印漬（Immunobloting）單克隆抗體鑒定及各種抗原-抗體體系的檢測。

Dot-ELISA以纖維素膜代替常規ELISA中常用的聚苯乙烯酶標板，這種微孔濾膜對樣品吸附量大，且包被牢固，所以樣品用量少，試驗結果可通過(guò)顏色斑點(diǎn)的出現與否和色澤進(jìn)行判定，不需特殊儀器。常規ELISA中的直接法、間接法、夾心法等均適合用于Dot-ELISA.其試驗程序與常規ELISA相似，加抗原或抗體與膜上，封閉、洗滌，然后加入其他試劑進(jìn)行免疫反應、底物顯色反應，zui后肉眼觀(guān)察出現斑點(diǎn)情況做出判斷。在現有的Dot-ELISA試驗研究中，有的是將抗原（抗體）包被好的膜或在包被之前用圓形打孔器壓跡或用筆畫(huà)成幾毫米的小方塊，包被、封閉之后剪開(kāi)，分別放入聚苯乙烯酶標板的小孔中，然后再加各種試劑，有的采用完整膜的形式，預先在膜上畫(huà)格并做好標記。包被之后，將膜放入濕盒或平皿中，加入各種試劑或者直接將包被好的膜浸入到各種試劑中反應。包被、封閉好的膜可在4℃保持一段時(shí)間。Dot-ELISA簡(jiǎn)便、快速、經(jīng)濟、敏感、特異的特點(diǎn)深受人們歡迎，從而得到廣泛應用。