C6+luc大鼠腦膠質(zhì)瘤細胞熒光素酶標記

,C6luc

貨號：YJ-0088a

價(jià)格： 3200.0

規格： 1*10 ⁶

細胞介紹

膠質(zhì)細胞株C6是由Benda等用N-nitrosomethylurea誘導的大鼠膠質(zhì)瘤克隆，并經(jīng)過(guò)一系列的體外培養和動(dòng)物傳代交替后建成的。當細胞從低密度生長(cháng)到滿(mǎn)瓶時(shí)，S-100產(chǎn)量增加10倍。該細胞通過(guò)慢病毒轉染的方式攜帶Luc基因。

細胞特性

1） 來(lái)源：大鼠，膠質(zhì)瘤

2） 形態(tài)：成纖維細胞，貼壁生長(cháng)

3） 含量：>1*10 ⁶ 細胞數

4） 規格：T25瓶或者1mL凍存管包裝

5)  用途：僅供科研使用。

細胞篩選

該細胞為穩定轉染Luc的細胞，隨細胞傳代次數的增加，其Luc熒光強度會(huì )逐漸減弱。若實(shí)驗要求需要維持熒光強度，可以加入嘌呤霉素進(jìn)行再次篩選。        

建議收到細胞后至少傳3代，凍存留種后再進(jìn)行篩選。

初次進(jìn)行細胞篩選時(shí)，建議加入終濃度為1ug/ml嘌呤霉素的完全培養基維持培養，若無(wú)細胞漂浮或者漂浮較少，即可更換為含2ug/ml嘌呤霉素的完全培養基繼續篩選，以此類(lèi)推，至最高藥物濃度為5ug/ml。若篩選過(guò)程中，漂浮細胞大于60%，則停止篩選，換成正常培養基培養，至細胞密度約80%，可繼續加入同濃度嘌呤霉素進(jìn)行篩選。當加入5ug/ml嘌呤霉素時(shí)細胞正常增殖，可停止篩選，用不含藥完全培養基正常培養。

一．培養基及培養凍存條件準備

1） 準備F12K 培養基 (推薦：YJ-0007)  81.5 %,優(yōu)質(zhì)胎牛血清2.5 %,

     馬血清（國產(chǎn)）(推薦：YJ-002b)15 %,P/S青霉素-鏈霉素1 %.

注：?jiǎn)我谎迮囵B細胞的不能保證細胞狀態(tài)。

2） 培養條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養箱濕度為70%-80%。

3） 凍存液：90%血清，10%DMSO，現用現配。

二．細胞處理：

1） 凍存細胞的復蘇：

將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入到含4-6mL完全培養基的離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心3-5min，棄去上清液，完全培養基重懸細胞。然后將細胞懸液加入含6-8ml完全培養基的培養瓶（或皿）中37℃培養過(guò)夜。第二天顯微鏡下觀(guān)察細胞生長(cháng)情況和細胞密度。

2） 細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養。

對于貼壁細胞傳代可以參考以下方法：

1. 棄去培養上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。

2. 加入0.25％（w / v）胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培養瓶中（T25瓶1-2mL，T75瓶2-3mL），置于37℃培養箱中消化1-2分鐘（難消化的細胞可以適當延長(cháng)消化時(shí)間），然后在顯微鏡下觀(guān)察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養瓶后加入3-4ml含10%FBS的培養基來(lái)終止消化。

3.輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心3-5min，棄去上清液，補加1-2mL培養液后吹勻。將細胞懸液按1：2的比例分到新T25瓶中，添加6-8ml按照說(shuō)明書(shū)要求配置的新的完全培養基以保持細胞的生長(cháng)活力，后續傳代根據實(shí)際情況按1:2~1:5的比例進(jìn)行。

3）細胞凍存: 收到細胞后建議在培養前3代時(shí)凍存一批細胞種子以備后續實(shí)驗使用。

下面T25瓶為例；

1. 細胞凍存時(shí)按照細胞傳代的過(guò)程收集消化好的細胞到離心管中，可使用血球計數板計數，來(lái)決定細胞的凍存密度。一般細胞的推薦凍存密度為1×10⁶~1×10⁷個(gè)活細胞/ml.

2. 1000rpm離心3-5min，去掉上清。用配制好的細胞凍存液重懸細胞 ，按每1ml凍存液含1×10⁶~1×10⁷個(gè)活細胞/ml分配到一個(gè)凍存管中將細胞分配到凍存管中，標注好名稱(chēng)、代數、日期等信息。

3. 將要凍存的細胞置于程序降溫盒中，-80度冰箱中過(guò)夜，之后轉入液氮容器中儲存。同時(shí)記錄好凍存管在液氮容器中的位置以便后續查閱和使用。

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