DH5α感受態(tài)細胞說(shuō)明書(shū)

   DH5α Competent Cell

   目錄號：B0808

   保存條件：-80℃保存。

   組分說(shuō)明

                      Cat. No.                         B0808B

                      Size                             10×100  μl

                      DH5α  Competent  Cell            10×100  μl

                      Control DNA pUC19，0.1    ng/μl      10 μl

   產(chǎn)品簡(jiǎn)介

    本產(chǎn)品是采用大腸桿菌DH5α菌株經(jīng)特殊工藝處理得到的感受態(tài)細胞，可用于DNA

的熱擊轉化。DH5α是一種常用于質(zhì)?？寺〉木?，其φ80lacZΔM15基因產(chǎn)物可與載

體編碼的β-半乳糖苷酶氨基端實(shí)現α互補，可用于藍白斑篩選 recA1和endA1的突變

有利于克隆DNA的穩定和高純度質(zhì)粒DNA的提取。使用pUC19質(zhì)粒檢測，轉化效率可

達108，適用于的質(zhì)粒DNA克隆并能保證高拷貝質(zhì)粒的穩定復制。

本產(chǎn)品僅供科研使用，請勿用于臨床診斷及其他用途

注意事項

 1．感受態(tài)細胞一定要用干冰運輸。感受態(tài)細胞應在 -80℃下保存，不可反復凍融和放

    置時(shí)間過(guò)長(cháng)，以免降低感受態(tài)細胞的轉化效率。

    2．轉化所有步驟均在無(wú)菌條件下操作。

    3．包裝中有0.1ng/μl的pUC19DNA，供對照試驗使用。

    操作步驟

 1．取感受態(tài)細胞置于冰浴中。一次轉化感受態(tài)細胞的建議用量為50-100μl，可以根據實(shí)際情況分裝使用。

以下實(shí)驗以50μl感受態(tài)細胞為例。

 2．待感受態(tài)細胞融化后，向感受態(tài)細胞懸液中加入目的DNA（根據實(shí)際情況加入適量

    的DNA，通常100μl感受態(tài)細胞能夠被1ng超螺旋質(zhì)粒DNA所飽和），用移液器輕輕吹打混勻，冰浴30分鐘。

 3．42℃熱擊45秒，迅速將離心管轉移到冰浴中，冰上靜置2-3分鐘。

 4．每個(gè)離心管中加入450μl無(wú)菌的SOC或LB培養基（不含抗生素），混勻后置于37℃搖床，150rpm振蕩培養45分鐘使菌體復蘇。

 5．根據實(shí)驗需求，取適量已轉化的感受態(tài)細胞，加到含相應抗生素的SOC或LB固體瓊脂培養基上，用無(wú)菌的涂布棒將細胞均勻涂開(kāi)，將平板置于37℃直至液體被吸收，倒置培養，37℃培養12-16小時(shí)。

 注意：1）涂布用量可根據具體實(shí)驗調整。若轉化的DNA總量較多，可取少量轉化產(chǎn)物涂布平板；若轉化的DNA總量較少，可取200-300μl轉化產(chǎn)物涂布平板。若預計的克隆數較少，可通過(guò)離心（4,000rpm，2分鐘）后吸除部分培養液，懸浮菌體后將其涂布于平板中。

   2）新制備的固體培養基不易涂干，可將平板正置于37℃直至液體被吸收后再倒置培養。

   3）涂布剩余的菌液可置于4℃保存，如果次日的轉化菌落數過(guò)少，可以將剩下的菌液再涂布新培養基進(jìn)行培養。

實(shí)驗代做服務(wù)：