BL21(DE3)感受態(tài)細胞說(shuō)明書(shū)

BL21(DE3) Competent Cell

BL21(DE3)感受態(tài)細胞

目錄號：YJ0809

保存條件：-80℃保存。

組分說(shuō)明

                  Cat. No.                          YJ0809A

                  Size                              10×100 μl

                  BL21(DE3) Competent Cell          10×100 μl

                  Control DNA pUC19，0.1 ng/μl         10 μl

產(chǎn)品簡(jiǎn)介

　　本產(chǎn)品是大腸桿菌  BL21(DE3)菌株經(jīng)特殊工藝處理得到的感受態(tài)細胞，可用于

DNA的熱擊轉化。BL21(DE3)菌株適合表達非毒性蛋白，該菌株是以T7 RNA聚合酶為

表達系統的外源基因蛋白表達的宿主。T7噬菌體RNA聚合酶基因的表達受λ噬菌體

DE3區的lacUV5啟動(dòng)子調控，該區整合在BL21染色體上。使用pUC19質(zhì)粒檢測，轉化

效率可達10 7

本產(chǎn)品僅供科研使用，請勿用于臨床診斷及其他用途 

    注意事項

    1．感受態(tài)細胞一定要用干冰運輸。感受態(tài)細胞應在  -80℃下保存，不可多次凍融和放

       置時(shí)間過(guò)長(cháng)，以免降低感受態(tài)細胞的轉化效率。

    2．轉化所有步驟均在無(wú)菌條件下操作。

    3．包裝中有0.1 ng/μl的pUC19DNA，供對照試驗使用。

    操作步驟

    1．取感受態(tài)細胞置于冰浴中。一次轉化感受態(tài)細胞的建議用量為50-100 μl，可以根據實(shí)際情況分裝使用。

       以下實(shí)驗以50 μl感受態(tài)細胞為例。

    2．待感受態(tài)細胞融化后，向感受態(tài)細胞懸液中加入目的DNA（根據實(shí)際情況加入適量

       的DNA，通常100 μl感受態(tài)細胞能夠被1 ng超螺旋質(zhì)粒DNA所飽和），用移液器輕輕吹打混勻，冰浴30分鐘。

    3．42℃熱擊45秒，迅速將離心管轉移到冰浴中，冰上靜置2-3分鐘。

    4．每個(gè)離心管中加入450 μl無(wú)菌的SOC或LB培養基（不含抗生素），混勻后置于37℃搖床，150 rpm振蕩培養45分鐘使菌體復蘇。

    5．根據實(shí)驗需求，取適量已轉化的感受態(tài)細胞，加到含相應抗生素的   SOC或LB固體瓊脂培養基上，用無(wú)菌的涂布棒將細胞均勻涂開(kāi)，將平板置于37℃直至液體被吸收，

倒置培養，37℃培養12-16小時(shí)。

       注意：1）涂布用量可根據具體實(shí)驗調整。若轉化的DNA總量較多，可取少量轉化產(chǎn)物涂布平板；若轉化的DNA總量較少，可取200-300 μl轉化產(chǎn)物涂布平板。若預計的克隆數較少，可通過(guò)離心（4,000 rpm，2分鐘）后吸除部分培養液，懸浮菌體后將其涂布于平板中。

2）新制備的固體培養基不易涂干，可將平板正置于37℃直至液體被吸收后再倒置培養。

3）涂布剩余的菌液可置于4℃保存，如果次日的轉化菌落數過(guò)少，可以將剩下的菌液再涂布新培養基進(jìn)行培養。