小鼠脾臟淋巴細胞分離液試劑盒LTS1092PK

小鼠脾臟淋巴細胞分離液試劑盒說(shuō)明書(shū)
 
【產(chǎn)品規格】
 
200ml/Kit
 
【產(chǎn)品組成】
 
為方便廣大用戶(hù)使用，試劑內容如下：
 

 
【實(shí)驗前準備】
 
A． 適用儀器
 
zui大離心力可達 1200g 的水平轉子離心機
 
B． 耗材
 

 
全過(guò)程樣本、試劑及實(shí)驗環(huán)境均需在 20±2℃的條件下進(jìn)行。
 
1. 首先制備脾臟組織單細胞懸液，制備方法詳見(jiàn)“脾臟組織單細胞懸液制備技術(shù)”。
 
2. 取一支 15ml 離心管，加入與脾臟組織單細胞懸液等量的分離液（注：分離液zui少不得 少于 3ml）。
 
3. 用吸管小心吸取脾臟組織單細胞懸液加于分離液液面上，400-500g，離心 20-30min。（注： 根據脾臟組織單細胞懸液量確定離心條件，脾臟組織單細胞懸液量越大，離心力越大， 離心時(shí)間越長(cháng)，具體離心條件需客戶(hù)自行摸索，以達到分離效果）。

 
4. 離心后，此時(shí)離心管中由上至下分為四層。*層為稀釋液層。第二層為環(huán)狀乳白色淋 巴細胞層。第三層為透明分離液層。第四層為紅細胞層。
 
5. 用吸管小心吸取第二層環(huán)狀乳白色淋巴細胞層到另一 15ml 離心管中，向離心管中加入 10ml 清洗液（產(chǎn)品編號：2010X1118），混勻細胞。
 
6. 250g，離心 10min。
 
7. 棄上清。
 
8. 用吸管以 5ml 清洗液（產(chǎn)品編號：2010X1118）重懸所得細胞。
 
9. 250g，離心 10min。
 
10. 重復 7、8、9，棄上清后以 0.5ml 后續實(shí)驗所需相應液體重懸細胞。
 
【注意事項】
 
1. 全過(guò)程樣本、試劑及實(shí)驗環(huán)境均需在 20±2℃的條件下進(jìn)行。為獲得的實(shí)驗結果，zui 好在取樣 2h 內進(jìn)行實(shí)驗，樣品存放時(shí)間越長(cháng)，細胞分離效果越差。樣品放置超過(guò) 6h 后 分離效果更差甚至不能達到分離目的。
 
2. 本實(shí)驗不要使用高聚合材質(zhì)（如聚苯乙烯）的塑料制品，應使用無(wú)靜電、低靜電離 心管及未經(jīng)堿處理過(guò)后的玻璃制品，因為靜電作用將導致細胞貼壁、堿處理的玻璃表面 會(huì )變成毛面，影響細胞分離效果。
 
3. 吸取過(guò)多的淋巴細胞層及分離液層會(huì )導致分離液交界處的粒細胞被吸出從而使混雜的粒
 
細胞數量增加。
 
4. 分離液用量大于脾臟組織單細胞懸液樣本時(shí)，分離效果更佳。
 
5. 如實(shí)驗后細胞得率或活性過(guò)低，請以尋求幫助，具體詳 見(jiàn)下方生產(chǎn)企業(yè)信息。
 
【儲存條件及有效期】
 
18-25℃保存，有效期 2 年。本品易感染細菌，需無(wú)菌條件操作。無(wú)菌條件下操作，啟
 
封后置常溫保存。如 4℃保存，本分離液易出現白色結晶，影響分離效果。
 
【參考值（參考范圍）】
 
本實(shí)驗淋巴細胞提取率及純度均大于 80%。
 
下表為成年人外周血中各種細胞的數量及比例，用戶(hù)可適當進(jìn)行參考。
 

 
 
 
50%-70% 20%-40% 3%-8%
 
【相關(guān)實(shí)驗技術(shù)方案】
 
1. 脾臟組織單細胞懸液制備技術(shù)。
 
2. 所獲得淋巴細胞的培養技術(shù)。
 
3. 所獲得淋巴細胞的核酸提取技術(shù)。
 
4. 所獲得淋巴細胞的鑒定方法 A.流式細胞技術(shù) B.免疫組化技術(shù)
 
C.原位雜交技術(shù)
 
D.PCR 技術(shù)
 
注：上述技術(shù)方案詳情請登陸本搜索“細胞分離、
 
純化、擴增、鑒定及生物治療技術(shù)手冊”，并在說(shuō)明書(shū)項目欄下下載使用。
 
【可能存在的問(wèn)題及解決方法】
 
1. 由于血液粘度、細胞密度等差異可能造成的問(wèn)題及解決方案如下表所示：
 

 
2. 本分離液分離細胞的原理為密度梯度離心，其密度與溫度、大氣壓等密切相關(guān)。不同地 區客戶(hù)可根據當地情況對離心條件進(jìn)行適當調整。建議對離心條件進(jìn)行調整時(shí)，恒定離 心時(shí)間，對離心轉速進(jìn)行調整。
 
3. 本分離液依照標準，全部使用藥用級原料，性能指標與國產(chǎn)同類(lèi)產(chǎn)品略有不同，可 能出現紅細胞沉降不*的情況，可以適當加大離心轉速。
 
注：在對離心條件進(jìn)行調整時(shí)，離心轉速的加減以 50-100g 為基數，直至達到分離效果，
 離心力zui小不得小于 400g，zui大不得大于 1200g。離心時(shí)間以 20-30min 為準。